咱们先说说为啥现在做细胞和基因治疗的人都爱用HTRF或者AlphaLISA去测p24。现在慢病毒作为CAR-T、干细胞还有基因治疗里最重要的运输工具，生产出来的质量必须得严格把关。大家都知道，想把实验做好、让结果一致，第一步就是得准确快速地测出慢病毒的滴度，而这就离不开对它核心蛋白——p24抗原的精准定量。咱们来看图1，这个图展示了HIV的结构（DOI: 10.12677/OJNS.2017.5202）。HIV的p24蛋白由231个氨基酸组成，像个圆锥形状包在病毒的外面，里面藏着基因组RNA还有核衣壳复合物。它其实是p55 Gag这个大蛋白被病毒蛋白酶切出来的一段产物。在HIV组装、成熟还有脱离宿主的时候，p24和它原来的55 kDa前体蛋白都起着关键作用。咱们现在用慢病毒载体给哺乳动物细胞递送转基因，检测p24的含量就成了衡量转导效率的标准办法。 咱们接着说说法规要求吧。国家给的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》里提到，1.4条说了算病毒含量得通过总颗粒数、基因组拷贝数、结构蛋白含量这些来定。《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》第四章第11条也说除了看转导滴度，还可以通过测病毒特定抗原或者基因拷贝数来测物理滴度，比如慢病毒p24的含量。《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）》4.1.3条则说滴度是个重要指标，要做工艺监控和放行检测，得选灵敏度高、准的方法做研究。 瑞孚迪公司就是基于HTRF和AlphaLISA技术平台给大家提供p24的高通量检测试剂盒的。相比传统ELISA这种方法，这两种均相检测法的线性区间更宽——大概有4个数量级的范围——这样就不用老往回调稀释倍数或者洗板子了，结果自然就更准、效率也更高。 咱们再看看这两种技术的原理。图2画的是HTRF检测原理：它用Eu标记了一个抗体，再用d2标记另一个抗HIV p24的抗体。当这两个带标记的抗体夹住抗原靠得很近时，就会发生荧光共振能量转移（FRET），受体在665 nm处发光。光的强度直接跟p24浓度成正比。图3是AlphaLISA的检测原理：分别有供体微珠和受体微珠标记的两种抗体同时去抓目标物，让两种微珠挨在一起。供体微珠受激发产生单线态氧后就能激活旁边的受体微珠在615 nm发出信号。信号强弱也跟着分析物浓度走。 这两种技术的优势挺明显的。图4展示了它们的动态范围对比：AlphaLISA能达到4个数量级以上的范围（10~100000pg/ml），这比ELISA的那2个数量级（52~10000pg/ml）强多了。有了这么宽的范围就不用反复试预实验了，一次就能搞定差异大的样本，还能避免hook效应带来的麻烦。 操作起来也很方便和高通量。不用洗板子步骤少了很多就简单多了流程也就差不多2个小时搞定，特别容易做成自动化的设备兼容384孔板或者更高规格的板呢。图5分别展示了HTRF和AlphaLISA的检测流程。 对珍贵样本来说这就太友好了：HTRF只需要16μl样本就行，AlphaLISA更是只要1~5μL这么少的量就能测。 最后咱们得确认下数据准不准。研究发现只要在最佳范围里做出来的结果 AlphaLISA和ELISA测的滴度高度一致呢。 总的来说随着CAR-T和基因治疗的快速发展 病毒载体的生产质控现在面临效率精度还有通量的全面挑战 这时候HTRF和AlphaLISA这两种均相技术就特别适合直接响应这些挑战 它们因为动态范围宽检测通量高样本消耗少 就成了推动创新疗法从实验室到临床转化的重要工具 产品列表里面还有其他规格耗材可以推荐哦。