在培养酵母菌这事儿上,大家常听说过的“黄金液体”,指的其实就是蔗糖豆芽汁培养基。很多人看教材第21页的时候会发现,里面提到的这种配方特别管用。因为真菌和细菌的胃口差别很大,酵母菌喜欢糖分高、酸度适中的环境,细菌在这种环境下就不太好生存。这个培养基正好利用了这一点,把酵母菌从酒曲里分离出来。在操作的时候,得先把各个概念弄清楚再动手。高中生物课上通常会讲,培养基按状态分有固体、半固体、液体;按功能分有选择、鉴别;按来源分有天然、合成。 拿到这种培养基,想要成功分离出酵母菌大概分四步走。第一步是准备配方,这里面得讲究点技巧。豆芽汁能提供氮源和维生素,蔗糖给酵母供能,乳酸负责调节酸碱度。这三样东西一配合,酵母菌在通气的液体里跑得飞快,很快就能比霉菌先长成优势菌落。第二步是取样,这一步挺关键。你得拿把灭菌过的小刀切开曲块的内部取一小块样品放进培养基里,然后在25到30摄氏度的摇床上静置两天。之后再通过梯度稀释、划线或者涂布的方法重复做上3到4次操作。杂菌会被逐渐稀释掉,目标酵母也就慢慢“单干”了。 第三步是纯化手段,你可以选择稀释涂布或者平板划线中的一种方法来做。不管你选哪一种,都必须重新配置一份加了1.5%到2%琼脂的固体培养基。这样做是为了让菌体能稳稳地“站住脚”。第四步是测耐受极限,这里有个关键点。当酒精浓度达到16%的时候,酵母的发酵就会停下来。这是因为酒精积累对细胞膜和蛋白质有毒害作用。如果你想知道某株酵母的耐受极限,可以配一些含有不同梯度酒精的平板来测试。从16%开始逐渐升高浓度,看哪个格子不长菌了,那个浓度就是这株酵母的“封顶值”。 你也可以在自家厨房里配出这种专业的液体培养基。成分很简单:10克黄豆芽、5克蔗糖、1.5到2克琼脂,再加水100毫升就行了。自然pH值不用调太高,让乳酸自然生成就行。配制的时候分四步来做。首先煮豆芽取汁:把10克新鲜黄豆芽加水100毫升小火煮30分钟,然后用纱布过滤掉渣滓,把漏掉的水分补上就能得到10%的豆芽汁了。 接下来配液调固:在每100毫升豆芽汁里加5克蔗糖和2克琼脂一起煮沸融化掉;再把体积补足到合适的量;然后分装到试管斜面上或者三角瓶里塞好口扎紧包裹;最后放进高压锅里100帕压下灭菌20分钟就冷却备用了。 等到菌落长出来的时候挑取单克隆进行摇瓶发酵实验。每隔12个小时测一次酒精浓度;当曲线不再升高的那一刻的数值就是该株酵母的最高耐受阈值了;掌握了这个数据就能在酿酒、生物能源或者药物合成这些领域里更精准地“对症下料”了。