东北林大/沈阳农大的王玉成团队最近给Journal of Genetics and Genomics投了一篇论文，专门讲他们开发了一个叫PN-ESI的新方法，用来检测蛋白质和DNA的结合。为什么要搞这个呢？因为以前传统的检测手段各有缺点：像体外做的EMSA虽然简单快速，但用的是重组蛋白，天然的修饰状态保不住；而像体内做的ChIP虽然能还原真实生理状态，但操作起来费时又费力，对抗体和条件要求还特别高。所以大家都希望有个方法，既能操作简便又能保留蛋白质的自然状态。这次的PN-ESI刚好做到了这点，它结合了体内体外的优点。 具体怎么做的呢？就是先在植物里把带标签的目标蛋白临时表达出来，提取细胞核提取物后和没标记的DNA片段在体外反应。接着用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳把东西分开，最后用免疫印迹去抓复合物。这个技术灵敏度比传统的EMSA高了至少10倍，结果也跟ChIP挺一致的。他们还用这个方法去检测了转录因子PdbSCL1和BpTCP20跟DNA的互动，还做了EMSA验证。 最关键的是，PN-ESI直接用的是细胞核里天然功能状态的蛋白质，把磷酸化、乙酰化这些关键修饰都留了下来。这样就能更准确地知道修饰对蛋白质和DNA结合的影响。这就给研究翻译后修饰提供了靠谱的技术支持。总的来说，PN-ESI这个半体内检测技术体系快速又灵敏，能如实反映蛋白的功能状态。它跟EMSA和ChIP可以互相补充，在接近生理条件下分析蛋白质和DNA的作用。 这篇文章的第一作者是东北林业大学林木遗传育种全国重点实验室的博士后王鹏宇，通讯作者是王玉成教授。研究得到了国家自然科学基金的资助。